VENTANA MMR RxDx Panel

tolkningsguide för endometriellt

karcinom (EC)

VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody

Innehållsförteckning

Inledning 1

Fallkriterier för klinisk utvärdering 5

Tolkningssalgoritm 6

Kontroller 8

Interna positiva kontroller 8

Arbetsflöde för prov 10

Referensbilder 12

Kvalificerade fall 12

Ej kvalificerade fall 14

Utmanande fall 18

Inverkan av föranalytiska förhållanden på VENTANA MMR RxDx Panel 28

som spontant inträffar vid DNA-replikering. Metoder som baseras

på en polymeraskedjereaktion (PCR) har visat att MMR-fel ofta

leder till mikrosatellitinstabilitet (MSI), ett tillstånd där korta

tandemupprepningar av nukleotider infogas i DNA:t. När antalet

upprepningar är lika med eller högre än 30% av undersökta

mikrosatellitloci kan MSI vidare karakteriseras som MSI-High

(MSI-H). Defekter i MMR-maskineriet har tillskrivits mutationer i

MMR-proteinerna, oftast MLH1, PMS2, MSH2 och MSH6.

MLH1- och PMS2-proteinerna fungerar normalt tillsammans

i ett heterodimert komplex, liksom MSH2- och MSH6-

och somatisk mutation på grund av replikeringsfel. MMR-

immunhistokemi (IHC) kan visa sig vara användbart för att

identifiera MMR-gener som sannolikt innehåller germinala eller

somatiska förändringar.

Traditionellt har behandlingen för cancerpatienter dikterats av

den specifika cancerformen. Framväxande immunbehandlingar,

särskilt sådana som ändrar cellvägar som rör proteiner för

programmerad celldöd 1 (PD-1) eller liganden för programmerad

celldöd 1 (PD-L1) förändrar dock klinikers behandlingsstrategier.

PD-1 är en hämmande receptor som uttrycks på T-celler efter

tumörspecifik T-cellsimmunitet.

cancerformer har defekt MMR (dMMR) och uppvisar MSI. Flera

studier har visat att defekt MMR sammanfaller med ett högre

uttryck av PD-1- eller PD-L1-proteiner. Därmed kan MMR-

proteiner vara användbara som prediktiva biomarkörer för PD-1-

inriktad behandling. Specifikt kan avsaknad av uttryck för ett eller

flera MMR-proteiner förutsäga en ökad sannolikhet för att svara

på sådan behandling. PD-1-hämmare kan vara främjande vid

många vanliga cancertyper med hög frekvens av defekt MMR

och/eller MSI-H oavsett cancerns ursprungsvävnad. Därför

kommer patienter där PD-1-inriktad behandling övervägs att

gynnas av en behandlingsvägledande diagnostisk analys för att

12

12

med mikrosatellitstabil (MSS) EC.

beror på sjukdomens grad, histologi och stadium,

utvärdering av EC-tumörernas MMR-status underlättar för att

ställa prognos och vägleda behandlingen

patienter där PD-1-inriktad behandling övervägs att gynnas av

en behandlingsvägledande diagnostisk analys för att identifiera

MMR-statusen.

Avsaknad av uttryck av något av de väsentliga MMR-proteinerna,

inklusive MLH1, PMS2, MSH2 eller MSH6, orsakar defekt MMR.

Förekomst av färgning för alla fyra MMR-proteinmarkörer i

Inledning

VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom 1

2 VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom

Den här guiden är till för att:

• Ge patologer ett verktyg för att underlätta den kliniska

tumörsnitt som färgats med VENTANA MMR RxDx Panel i

enlighet med föreslagen produktmärkning.

• Tillhandahålla fotografiska bilder som illustrerar de

färgningsmönster som kan uppstå vid färgning av tumörceller

med VENTANA MMR RxDx Panel.

• Ge exempel på bilder av utmanande fall för att ge vägledning

vid utvärdering av sådana.

VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom 3

(d.v.s. lymfocyter) i närheten av livskraftiga tumörer fungerar som godtagbara interna positiva kontroller.

Färgningsegenskaper

Celler som är märkta med varje analys i VENTANA MMR

RxDx Panel utvärderas för förekomst eller frånvaro av

diaminobenzidinesignalen (DAB). VENTANA MMR RxDx Panel-

färgning i MMR-proteiner följer ett nukleärt mönster. Frånvaro av

någon av MMR-proteinerna som detekteras av VENTANA MMR

RxDx Panel observeras i tumörcellernas kärnor. MMR-statusen

klassificeras som intakt uttryck eller förlust av uttryck, endast

baserad på entydig nukleär färgning.

Signalen kan fördelas jämnt och ha en enhetlig intensitetsnivå i

hela tumörens neoplastiska delar eller fördelas heterogent med

mer än en intensitetsnivå. Den ska lätt kunna detekteras vid

lågeffektförstoringar som 2x eller 4x. En grafisk representation

av VENTANA MMR RxDx Panel-märkta neoplastiska celltyper/

färgningselement finns i avsnittet Referensbilder i den här

tolkningsguiden. Den artmatchade, negativa reagenskontrollen

(NRC) används för att utvärdera förekomst av bakgrund i

testprover och för att upprätta en baslinje för färgningsintensitet.

finns i tabell 2.

lymfocyter

4 VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom

MSH6 10x MSH6 10x

Acceptanskriterier för morfologi och bakgrund

För varje fall som färgas med VENTANA MMR RxDx Panel bedöms acceptansen för vävnadsmorfologi och bakgrund enligt kriterierna i

tabell 1.

Fallkriterier för klinisk utvärdering

färgning

Tabell 1: Acceptanskriterier för morfologi och bakgrund

Klinisk tolkning Kriterier för färgningsmönster

Utvärderbar (alla måste vara sanna)

1. H&E har ≥ 50 livskraftiga tumörceller

2. Objektglaset med Negative Reagent Control är godtagbart

3. Morfologin är godtagbar

4. Bakgrunden är godtagbar

5. Interna positiva kontroller har en entydig nukleär färgning

Ej utvärderbar (om ett av kriterierna i

4. Bakgrunden är ej godtagbar

5. Interna positiva kontroller har inte en entydig nukleär färgning

6. Tolkning är inte möjlig på grund av vävnadsförlust, tumörfrånvaro,

artefakter och/eller kantartefakter

Tabell 2: Kriterier för utvärderbar och ej utvärderbar

VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom 5

12 VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom

VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom 13

Kvalificerat fall 2: MLH1, PMS2, MSH2 och MSH6 intakt uttryck vid endometriellt karcinom som uppvisar stark nukleär färgning i

tumörceller vid förekomst av lämpligt färgade interna kontroller. Godtagbara Negative Reagent Controls är mus NRC (mNRC) och kanin

NRC (rNRC).

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x

14 VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom

Ej kvalificerat fall 1: MLH1 och PMS2 förlust av uttryck vid endometriellt karcinom som inte uppvisar någon nukleär färgning i

tumörceller vid förekomst av lämpligt färgade interna kontroller. MSH2 och MSH6 uppvisar intakt uttryck. Cytoplasmisk färgning ska

inte beaktas vid tolkning av status. Godtagbara Negative Reagent Controls är mus NRC (mNRC) och kanin NRC (rNRC).

Ej kvalificerade fall

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x

VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom 15

Ej kvalificerat fall 2: MLH1 och PMS2 förlust av uttryck vid endometriellt karcinom som inte uppvisar någon nukleär färgning i

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x

16 VENTANA MMR RxDx Panel för endometriellt karcinom

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x