3M Allergen Protein ELISA Kit Bruksanvisningar

(Svenska)

SV

1

Datum för utgåva: 2017-11

Produktinformation

Hazelnut Protein ELISA Kit

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) för kvantitativ analys av hasselnötsproteiner.

Produktbeskrivning och avsedd användning

3M™ Hazelnut Protein ELISA Kit är avsedd för screening av hasselnötsproteiner i rengör-på-plats (CIP) sista sköljvattnet,

sköljvattenprover, livsmedelsingredienser och processade livsmedelsprodukter.

Hazelnut Protein ELISA Kit använder en sandwich-ELISA. De hasselnötsproteiner som nns närvarande i provet reagerar

med anti-hasselnötsantikroppen, som har adsorberats till ytan av polystyrenmikrotiterbrunnar. Efter avlägsnandet

av obundna proteiner genom tvättning tillsätts hasselnötsantikroppar konjugerade med pepparrotsperoxidas

(HRP). Dessa enzymmärkta antikroppar bildar komplex med det tidigare bundna hasselnötsproteinet. Efter ett

andra tvättningssteg detekteras enzymet som är bundet till immunosorbenten genom tillsättning av ett kromogent

substrat, 3,3’,5,5’-tetrametylbensidin (TMB). Färgutvecklingen från denna enzymatiska reaktion varierar direkt

med koncentrationen av hasselnötsprotein i provet som testas; därför utgör absorbansen vid 450 nm ett mått

på koncentrationen av hasselnötsprotein i provet. Mängden hasselnötsprotein i provet kan extrapoleras från

standardkurvan, vilken är konstruerad från standarder med känd koncentration, och justeras för att beakta

provutspädningen.

3M Hazelnut Protein ELISA Kit är avsedd för användning i laboratoriemiljö av yrkespersoner som är utbildade i

laboratorieteknik. 3M har inte dokumenterat användningen av denna produkt inom andra industrier än livsmedels- och

dryckesindustrin. 3M har exempelvis inte dokumenterat produkten för testning av läkemedel, kosmetika, kliniska prover

eller veterinärprover. 3M Hazelnut Protein ELISA Kit har inte utvärderats med samtliga möjliga livsmedelsprodukter,

livsmedelsbearbetningsmetoder och testprotokoll.

3M Hazelnut Protein ELISA Kit innehåller 96 tester, som beskrivs i tabell 1.

Tabell 1. Satsens delar

Artikel Identikation Beredning

(se avsnittet

Reagensberedning

för information)

Förvaring Stabilitet

3M™ Hazelnut Protein

ELISA brunnar

En foliepåse med en platta

med 96 borttagbara

antikroppsbelagda brunnar.

Klara att användas. 2-8 °C i förseglad foliepåse

med torkmedel.

Återförslut foliepåsen

som innehåller

oanvända brunnar

och torkmedel.

Förvaras vid 2-8

°C för att bibehålla

stabiliteten fram till

utgångsdatumet för

satsen.

3M™ Hazelnut HRP-

konjugat (10X)

En ampull med 1,5 ml 10X

pepparrotsperoxidas (HRP)

konjugerad antikropp (10X).

Späd 1/10

omedelbart innan

användning för

att bereda en 1X

arbetslösning.

2-8 °C i mörker. 10X konjugatet

är stabilt fram

till satsens

utgångsdatum.

3M™ Hazelnut Protein

standardkoncentrat

En ampull med en

känd koncentration av

hasselnötsprotein.

Se avsnittet ELISA-

procedur för

standardberedning.

2-8 °C. Förvara inte i frys. 3M Hazelnut Protein

standardkoncentrat

är stabilt fram

till satsens

utgångsdatum.

3

(Svenska)

SV

2

3M™ spädningslösning

(5X)

En aska med 50 ml 5X

spädningslösning.

Späd 1/5

omedelbart innan

användning för

att bereda en 1X

arbetslösning.

2-8 °C The 5X 3M

spädningslösning är

stabil fram till satsens

utgångsdatum.

3M™ tvättlösning (20X) En aska med 50 ml 20X

tvättlösning.

Späd 1/20 för

att bereda en 1X

arbetslösning.

2-8 °C för både 1X

arbetslösning och 20X

tvättlösningskoncentrat.

20X 3M tvättlösning

är stabil fram

till satsens

utgångsdatum. 1X

tvättlösning är stabil

i minst en vecka efter

beredningen.

3M™ extraktionsbuert

E26 (4X)

En aska med 120 ml 4X

extraktionsbuert.

Späd 1/4 för att

bereda en 1X

arbetslösning.

Arbetslösningen

bör värmas upp till

50-60 °C innan

användning.

2-8 °C för både 1X

arbetslösning och 4X 3M

extraktionsbuertkoncentrat.

1X extraktionsbuert

och 4X 3M

extraktionsbuert

är stabila fram

till satsens

utgångsdatum.

3M™ kromogen

substratlösning

En aska med 12 ml

3,3’,5,5’-tetrametylbensidin

(TMB).

Klara att användas. 2-8 °C i mörker. Skyddas från ljus.

3M kromogen

substratlösning är

stabil fram till satsens

utgångsdatum.

3M™ stopplösning En aska med 12 ml 0,3 M

svavelsyra.

Klara att användas. 2-8 °C 3M stopplösning är

stabil fram till satsens

utgångsdatum.

Material som inte nns i satsen:

• Precisionspipetter och pipettspetsar för att samla 10 till 100 l

• Provrör

• Bricka för mikrotiterplatta/aspirator

• Destillerat eller avjoniserat vatten

• Avläsare för mikrotiterplatta

• Diverse laboratoriematerial för beredning av reagens och buertlösningar

• Timer

• Vortexblandare

• Skakvattenbad eller skakinkubator

• Orbital shaker

Säkerhet

Användaren ska läsa, förstå och följa all säkerhetsinformation i anvisningarna till 3M Hazelnut Protein ELISA Kit. Behåll

säkerhetsanvisningarna för framtida bruk.

VARNING! Indikerar en farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i dödsfall eller allvarliga

personskador och/eller materiella skador.

OBSERVERA! Indikerar en potentiellt farlig situation som, om den inte undviks, kan resultera i materiella skador.

W VARNING

För att minska riskerna för kemikalieexponering ska du:

• Kassera enligt gällande lokala/regionala/industriella normer och föreskrifter.

• Användaren måste utbilda sin personal i rådande och korrekta testtekniker: till exempel god laboratoriesed

1

eller

ISO/IEC 17025

2

.

(Svenska)

SV

3

• Följ alltid praxis för standardiserad laboratoriesäkerhet, inklusive användning av lämpliga skyddskläder och

skyddsglasögon vid hantering av reagenser.

• Undvik att 3M stopplösning får kontakt med huden, se säkerhetsdatabladet för ytterligare säkerhetsinformation.

För att minska att riskerna som förknippas med falska-negativa resultat leder till att kontaminerade produkter släpps

ut ska du:

• Förvara 3M Hazelnut Protein ELISA Kit enligt föreskrifterna på förpackningen och i produktinformationen.

• Använd 3M Hazelnut Protein ELISA Kit med livsmedels- och miljöprover som har validerats internt eller av en tredje

part.

• Följ protokollet och utför testerna exakt så som beskrivs i relevant produktinformation.

• 3M har inte dokumenterat användningen av 3M Hazelnut Protein ELISA Kit inom andra industrier än livsmedels-

och dryckesindustrin. 3M har exempelvis inte dokumenterat produkten för testning av läkemedel, kosmetika,

kliniska prover eller veterinärprover.

För att minska att riskerna som förknippas med felaktiga resultat leder till att kontaminerade produkter släpps ut ska du:

• Använd alltid 3M Hazelnut Protein ELISA Kit före utgångsdatumet.

• Alltid bereda arbetslösningar med användning av koncentrerade reagens som hör till 3M Hazelnut Protein ELISA Kit

vid 20-25 °C temperatur.

• 3M Hazelnut Protein standardkoncentrat får inte frysas.

• Om den kromogena substratlösningen blir blå ska den inte användas. Följ god laboratoriesed

1

för att undvika

korskontaminering av 3M kromogen substratlösning.

OBSERVERA

För att minska riskerna som förknippas med felaktiga resultat:

• Provstabilitet efter extraktioner har inte utvärderats. ELISA-proceduren bör genomföras strax efter

provextraktionen.

• Hantera 3M Hazelnut Protein standarder i enlighet med god laboratoriesed

1

för att undvika korskontaminering av prover.

Se säkerhetsdatabladet för mer information.

Besök vår webbsida på www.3M.com/foodsafety eller kontakta din lokala 3M-representant eller -återförsäljare för mer

information om dokumentation av produktprestanda.

Användaransvar

Det åligger användarna att bekanta sig med produktinstruktioner och produktinformation. Besök vår webbsida på

adressen www.3M.com/foodsafety eller kontakta din lokala 3M-representant eller -leverantör för mer information.

Precis som med alla testmetoder som används för matanalys kan testmatrisen påverka resultaten. Vid val av

testmetod är det viktigt att inse att externa faktorer som provtagningsmetod, testprotokoll, provpreparering, hantering

och laboratorieteknik kan påverka resultat. Matprovet i sig kan påverka resultatet.

Det är användarens ansvar att välja en testmetod eller produkt och att utvärdera tillräckligt antal prover för att försäkra

användaren om att den valda testmetoden uppfyller användarens kriterier.

Det åligger också användaren att fastställa att en testmetod och dess resultat uppfyller kraven från dennes kunder och

leverantörer.

Liksom med alla testmetoder utgör inte resultat som erhållits från användning av någon produkt från 3M

Livsmedelshygien en garanti för kvaliteten hos de matriser eller processer som testats.

Begränsning av garantier/Begränsad åtgärd

MED UNDANTAG AV VAD SOM UTTRYCKLIGEN ANGES I AVSNITT OM GARANTIBEGRÄNSNING FÖR

INDIVIDUELLA FÖRPACKNINGAR, FRÅNSÄGER SIG 3M ALLA UTTRYCKLIGA OCH UNDERFÖRSTÅDDA GARANTIER,

INKLUSIVE, MEN INTE BEGRÄNSAT TILL, ALLA GARANTIER BETRÄFFANDE SÄLJBARHET ELLER LÄMPLIGHET FÖR

ETT VISST ÄNDAMÅL. Om någon produkt från 3M Livsmedelshygien är defekt kommer 3M eller dess auktoriserade

leverantör att efter eget gottnnande ersätta produkten eller återbetala produktens inköpspris. Detta är den enda

ersättning som ges. Kunden måste meddela 3M och returnera produkten inom sextio dagar efter upptäckt av misstänkt

defekt. Var vänlig ring Kundtjänst (i USA: 1-800-328-1671) eller din ociella representant för 3M Livsmedelshygien för

en auktorisation avseende återsändande av produkt.

(Svenska)

SV

4

3M ansvarsfriskrivning

3M KOMMER INTE ATT PÅTA SIG NÅGOT ANSVAR FÖR FÖRLUST ELLER SKADOR, VARE SIG DIREKTA, INDIREKTA,

SÄRSKILDA, TILLFÄLLIGA ELLER EFTERFÖLJANDE SKADOR, INKLUSIVE, MEN INTE BEGRÄNSADE TILL,

FÖRLORADE VINSTER. Under inga omständigheter ska 3M:s ansvar i något som helst lagrum överskrida inköpspriset för

den påstått defekta produkten.

Förvaring och kassering

Förvara alla 3M Hazelnut Protein ELISA Kit-komponenter vid 2-8 °C temperatur. Förvara inte i frys. Förvara spädda

arbetslösningar enligt beskrivningen i tabell 1.

3M Hazelnut Protein ELISA Kit-komponenter bör inte användas efter utgångsdatumet. Utgångsdatum och partinummer

anges på etiketten på lådans utsida.

Kassera enligt gällande lokala/regionala/industriella normer och föreskrifter.

Bruksanvisning

Följ alla anvisningar noggrant. Underlåtenhet att göra detta kan leda till felaktiga resultat.

Beredning av reagens

Se till att alla reagenser har samma temperatur som omgivande temperatur (20-25 °C) innan användning. Använd ren

laboratorieutrustning för att späda och lagra arbetslösningar.

a. 3M extraktionsbuert

För att bereda 1X extraktionsbuert, tillsätt en del av 3M extraktionsbuert (4X) och späd i tre delar avjoniserat

eller destillerat vatten. Förvärm extraktionsbuerten (1X) till 50-60 °C i ett vattenbad eller skakinkubator innan

användning. Varje prov kräver 4,5 ml 1X extraktionsbuert.

b. 3M spädningslösning

För att bereda 1X spädningslösning, tillsätt en del 3M spädningsmedel (5X) till fyra delar avjoniserat eller destillerat

vatten. Varje prov kräver totalt 4,5 ml 1X spädningslösning.

c. 3M tvättlösning

För att bereda 1X tvättlösning, tillsätt en del 3M tvättlösning (20X) till 19 delar avjoniserat eller destillerat vatten.

Varje 3M ELISA-brunn kräver ungefär 2,5 ml 1X tvättlösning.

Obs! Bildandet av kristaller i 3M tvättlösningen (20X) kan ske vid lagring vid 2-8 °C. För upplösning av kristaller,

värm 3M tvättlösningen (20X) till 30-35 °C i ett vattenbad eller inkubator innan du bereder tvättlösningen (1X).

d. 3M Hazelnut HRP-konjugat

För att bereda 1X Hazelnut HRP-konjugat, tillsätt en del av 3M Hazelnut HRP-konjugat (10X) och späd i 9 delar 1X

spädningslösning. Bered direkt innan användning. Varje 3M ELISA-brunn kräver 100 l 1X Hazelnut HRP-konjugat.

Provberedning

Obs! Alla prover bör extraheras med 1X extraktionsbuert som förvärmts till 50-60 °C.

1.1 Bered prov för proteinextraktion i ett rent provrör eller engångsrör i enlighet med beskrivningen i tabell 2.

Tabell 2. Provberedning

Provmatris Provstorlek Spädning (1/10)

Fast föda 0,5 ± 0,02 g Tillsätt 4,5 ± 0,09 ml förvärmd 1X extraktionsbuert

Flytande föda 0,5 ± 0,01 ml Tillsätt 4,5 ± 0,09 ml förvärmd 1X extraktionsbuert

Rengör-på-plats (CIP) sista sköljvattnet 0,5 ± 0,01 ml Tillsätt 4,5 ± 0,09 ml förvärmd 1X extraktionsbuert

(Svenska)

SV

5

Fast

Flytande

1.2 Inkubera utspädda prover i ett skakvattenbad eller skakinkubator vid 50-60 °C under 25 ± 1 minuter. Ett annat

alternativ är att lämna proverna i ett vattenbad eller inkubator vid 50-60 °C och skaka manuellt under 1 minut var

femte minut.

1.3 Efter inkubering ska proverna centrifugeras vid 5 000-7 000 rpm (3 000 x g) under 20 till 30 sekunder för att

pellera partiklar eller låta dem sedimentera i 5 minuter i en provrörsställning.

1.4 Samla in 100 l från det mellanliggande (vattenhaltiga) lagret och tillsätt det till 900 l spädningslösning (1X).

Vortexblanda eller skaka för att blanda väl (detta motsvarar en 1/100 spädning av det ursprungliga provet.)

eller

50-60 °C

00:25:00

eller

3000 g/ 00:00:30

00:05:00

(Svenska)

SV

6

ELISA-procedur

2.1 Avlägsna en 3M ELISA-brunn per prov och/eller standard och placera brunnarna i brunnhållaren. Återför de

oanvända 3M ELISA-brunnarna till foliepåsen, försegla påsen och förvara den vid 2-8 °C.

2.2 Använd 3M Hazelnut Protein standardkoncentrat för att bereda en uppsättning av fem standarder spädda i

spädningsbuert (1X).

Standardnummer Standardkoncentration

(ng/ml)

Volym för standard som lagts

till 1X spädningsmedel

Volym för 1X

spädningslösning

5 810 10 l av 3M Hazelnut Protein

standardkoncentrat

990 l

4 270 200 l av standardnummer 5 400 l

3 90 200 l av standardnummer 4 400 l

2 30 200 l av standardnummer 3 400 l

1 10 200 l av standardnummer 2 400 l

0 0 0 400 l

2.3 Pipettera 100 l av varje standard i 3M ELISA-brunnarna.

• Standard 0 (1X spädningslösning)

• Standard 1 (10 ng/ml) ppb

• Standard 2 (30 ng/ml) ppb

• Standard 3 (90 ng/ml) ppb

• Standard 4 (270 ng/ml) ppb

• Standard 5 (810 ng/ml) ppb

2.4 Pipettera 100 l av det extraherade provet som bereddes i 1.4 i en 3M ELISA-brunn.

2.5 Inkubera 3M ELISA-brunnarna på en orbital shaker inställd till 400 rpm vid omgivande temperatur (20-25 °C) under

30 ± 2 minuter. Håll brunnarna täckta och vid horisontell jämn höjdnivå under detta steg för att förhindra avdunstning.

2.6 Efter inkubationen ska innehållet i 3M ELISA brunnarna aspireras.

2.7 Fyll varje 3M ELISA brunn fullständigt med 1X tvättlösning och aspirera. Om tvätten görs manuellt ska plattan

inverteras och innehållet ska hällas/skakas ut i en avfallsbehållare. Slå brunnarna hårt mot ett absorberande papper

för att avlägsna resterande tvättlösning. Upprepa detta steg tre gånger för totalt fyra tvättar.

2.8 Pipettera 100 l av 1X Hazelnut HRP-konjugat i varje 3M ELISA brunn. Inkubera på en orbital shaker inställd på 400

rpm vid omgivningstemperatur under 10 ± 2 minuter. Håll plattan täckt i mörker och vid horisontell jämn höjdnivå

under detta steg.

2.9 Upprepa steg 2.6 och 2.7 för att slutföra totalt fyra tvättar med tvättlösning (1X).

2.10 Pipettera 100 l av 3M kromogen substratlösning (TMB) i varje 3M ELISA brunn.

2.11 Inkubera på en orbital shaker inställd till 400 rpm vid omgivningstemperatur under 10 minuter. Håll plattan täckt i

mörker och vid horisontell jämn höjdnivå under detta steg.

2.12 Efter inkubering, tillsätt 100 l av 3M stopplösning i varje 3M ELISA brunn och bestäm absorbansen

(vid 450 nm) inom 30 minuter.

(Svenska)

SV

7

00:30:00/omgivande temperatur

00:10:00/omgivande temperatur

Resultatanalys

3.1 Subtrahera det genomsnittliga bakgrundsvärdet för varje prov (genomsnittlig absorbansavläsning av provet minus

genomsnittlig absorbansavläsning av standard noll.)

3.2 Använd en datorprogramvara som kan generera en 4-parameters logistikkurvanpassning och konstruera en

standardkurva genom att plotta koncentrationen i ng/ml (ppb) på x-axeln och absorbansavläsningen till varje

motsvarande standard på y-axeln. Ett andra ordningens polynom (kvadratisk) eller andra kurvanpassningar kan

också användas; de kommer emellertid att ge en mindre exakt passning av data.

3.3 Beräkna provkoncentrationerna från standardkurvan; resultatenheten är i ng/ml (ppb). Multiplicera sedan med

provutspädningsfaktorn för att få originalprovets koncentration. Om exempelvis den totala spädningen av provet

är 1/100 och provkoncentrationen för standardkurvan är 200 ng/ml (ppb) är den slutliga provkoncentrationen 200

ng/ml x 100 = 20 000 ng/ml (ppb), vilket är 20 g/ml (ppm).

Minsta prestandaegenskaper

a. Detektionsgränsen (Limit of Detection, LOD) är 1,9 ng/ml (ppb)

Detektionsgränsen denieras som den lägsta koncentrationen av allergenet i ett testprov som kan särskiljas från

ett sant blindprov vid en bestämd sannolikhetsnivå

3

. Den bestäms genom att lägga till tre standardavvikelser till det

genomsnittliga optiska densitetsvärdet för trettiosex standard nollreplikat och beräkna motsvarande koncentration.

b. Kvantieringsgränsen (Limit of Quantication, LOQ) är 1 ppm

Kvantieringsgränsen denieras som den lägsta nivån av allergenet i ett testprov som rimligen kan kvantieras vid

en specicerad nivå av precision

3

.

(Svenska)

SV

8

Precision

Metodens inbyggda precision Medelvärde %CV = <10 N=12

Internprecision för metoden Medelvärde %CV = <10 N=12

Specicitet och korsreaktivitet

Denna metod detekterar hasselnötsprotein och har testats gentemot olika prover för korsreaktivitet (tabell 3.)

Tabell 3. Korsreaktivitet för 3M Hazelnut Protein ELISA Kit.

Matrixprov % korsreaktivitet=

Mandelmjöl <1 %

Mandelmjölk <1 %

BLG <1 %

Paranöt <1 %

Bovetemjöl <1 %

Bovint kasein <1 %

Bovin mjölk <1 %

Cashew <1 %

Selleri <1 %

Kikärt <1 %

Kokosmjöl <1 %

Kokosmjölk <1 %

Majsmjöl <1 %

Fiskparvalbumin <1 %

Hasselnöt (+)

Limaböna <1 %

Macadamianöt <1 %

Senapsfrö <1 %

Ovomucoid <1 %

Ärtextrakt <1 %

Jordnötsmjöl <1 %

Pekannöt <1 %

Pinjenöt <1 %

Pistaschmjöl <1 %

Pumpafrö <1 %

Räka <1 %

Kammussla <1 %

Sesamfrö <1 %

Sorghummjöl <1 %

Sojamjöl <1 %

Sojamjölk <1 %

Solrosfrön <1 %

Valnöt <1 %

3M Allergen Protein ELISA Kit Bruksanvisningar

Relaterade papper

Andra dokument